RT4人膀胱移行细胞乳头瘤细胞

细胞详情
细胞名称
RT4人膀胱移行细胞乳头瘤细胞
货 号
SAc0343
组织来源
63岁白种人男性，移行细胞乳头瘤，膀胱
细胞形态
上皮细胞样
生长方式
贴壁生长
描 述
该细胞来源于一名63岁白人男性的移行细胞乳头状瘤，可作为转染宿主1971年十月消除了支原体污染。
培养条件
McCoy＇s 5A，10%胎牛血清；空气95%，二氧化碳5%；37℃培养
换液频率
2-3天
传代周期
3-5天
传代比例
1:3
冻存液配方
70%基础培养基，20%FBS，10% DMSO
安全性
BSL-1
供应限制
仅供研究之用。
细胞图片
细胞系收货须知
收到的货物会包含以下几种类型，您的货物属于：
□细胞冻存管：收到货物后，请检查箱子里面是否还有干冰。
● 若干冰已剩余不多，不能掩埋冻存管，请及时拍照，并第一时间联系销售。
● 若干冰充裕，可以安排复苏细胞；不安排复苏，请将细胞冻存管转移到液氮进行保存。短期（一周内）的存放可以放在-80冰箱，建议最好保存在液氮中。
□培养瓶的活细胞：收到请检查培养瓶是否完好，是否有漏液，培养基是否浑浊
●若出现以上问题请于当天和我们销售取得联系，我们会第一时间为您处理。
● 若以上问题都没有出现:拆掉培养瓶的外包装，在显微镜下对细胞进行多个视野，不同倍镜拍照。然后用酒精对瓶身进行彻底消毒，放在37度二氧化碳培养箱中进行复温。1-2小时后，拿出在显微镜下观察，并进行多个视野不同倍镜拍照。若细胞达到了可以传代的密度，请及时进行传代。若细胞密度不能进行传代，请回收培养瓶中的培养基，留适量培养基在瓶中，并将培养瓶放在培养箱继续培养即可。
□消化后的细胞悬液：收到请检查管子是否有漏液
●若漏液，请当天和我们销售取得联系，我们会第一时间为您处理。
●若完好，将管子用酒精彻底消毒，收集细胞悬液到离心管，1000转，离心5分钟，弃上清，加入培养基重悬，按照 比例分装到 个T25培养瓶，并补充培养基到 ml即可。
细胞操作详细步骤----贴壁细胞
1.细胞复苏
1.1离心法
1.1.1准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml离心管，离心管中加入4-5ml细胞完全培养基。
1.1.2取出细胞冻存管，在37度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。
1.1.3将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000转离心5分钟。
1.1.4倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
1.1.5将重悬好的细胞转移到T25细胞培养瓶，补充培养基到8ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。
1.2不离心法
1.2.1准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加入8ml左右培养基。
1.2.2取出细胞冻存管，在37度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。
1.2.3将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养，接种16小时后更换培养基。
2.细胞传代
2.1准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。
2.2弃上清，并加2-3mlDPBS轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2次。
2.3加入1ml胰酶，室温或者37度消化，直到细胞成片脱落，加入3-4ml完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。（注意：消化时间与所用胰酶效价，消化时候细胞密度以及温度等因素有关，建议第一次消化时候，多在显微镜下观察，以找到最佳消化时间）
2.4收集细胞悬液，1000转离心5分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。
2.5将重悬好的细胞按比例分装至T25细胞培养瓶，补充培养基到8ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。
3.细胞冻存
3.1准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。
3.2弃上清，并加2-3mlDPBS轻柔冲洗培养瓶内细胞1-2次。
3.3加入1ml胰酶，室温或者37度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。
3.4收集细胞悬液，1000转离心5分钟，弃上清。
3.5加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度0.8-1.5×106细胞/ml。
3.6将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。
4.注意事项
4.1建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养基可回收使用，保存在4度可使用一周。
4.2不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。
4.3建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。
Cell Line Authentication – STR Profiling Report
Table 1. Sample Code
Customer’s code
Company Code
249
20170410-15
Sample Type: Cell Line
Testing Type: STR
Sample Number:1
DNA was extracted by a commercial kit from CORNING (AP-EMN-BL-GDNA-250G). The twenty STRs including Amelogenin locus were amplified by six multiplex PCR and separated on ABI 3730XL Genetic Analyzer. The signals were then analyzed by the software GeneMapper.
Data Interpretation:
Cell lines were authenticated using Short Tandem Repeat (STR) analysis as described in 2012 in ANSI Standard (ASN-0002) by the ATCC Standards Development Organization (SDO) and in Capes-Davis et al., Match criteria for human cell line authentication: Where do we draw the line? Int J Cancer.2013;132(11):2510-9.
Ⅰ.Result
Table 2. Matching information on the cell line
Sample Code
Multi-allele
Cell line matched
Cell Bank
EV
Percentage
20170410-15
NO
RT-4
DSMZ
1
36/36
l Multi-allele means some STR contain more than two loci.
Ⅱ.Sample Description
A. The STR results showed that no multiple alleles were found in this cell line, and no cross contamination of human cells was found in the cell line.
B. The DNA of the cell lines found to match the type of cell lines in a cell line retrieval, DSMZ database shows that cells called RT-4. corresponding to the cell number 412 .
Ⅲ.Genotyping Result
Table 3. STR and Amelogenin Genotyping Results of Cell line
Loci
Sample information
Cell Bank information
Sample name：249
Cell line name：RT-4
Allele1
Allele2
Allele3
Allele1
Allele2
Allele3
D5S818
11
12
11
12
D13S317
8
8
8
8
D7S820
9
12
9
12
D16S539
9
9
9
9
VWA
14
17
14
17
TH01
9
9.3
9
9.3
AMEL
X
Y
X
Y
TPOX
8
11
8
11
CSF1PO
10
12
10
12
D12S391
20
22
FGA
22
24
D2S1338
18
19
D21S11
30
32.2
D18S51
15
17
D8S1179
12.2
15
D3S1358
15
17
D6S1043
13
13
PENTAE
7
10
D19S433
13
13
PENTAD
12
13
Ⅰ.Genotyping Strategy and Site Distribution
Attached Table. Experimental Strategy and Sites
Strategy 1
Strategy 2
Strategy 3
Strategy 4
1
TH01
TPOX
D3S1358
AMEL
2
D12S391
VWA
D13S317
D5S818
3
D7S820
D8S1179
D6S1043
D2S1338
4
CSF1PO
PENTAD
D16S539
D21S11
5
FGA
D19S433
D18S51
6
PENTAE
The allele match algorithm compares the 8 core loci plus amelogenin only, even though alleles from all loci will be reported when available.
2. DSMZ tools was used to carry on the cell line comparison, which contains 2455 cell lines STR data from ATCC, DSMZ, JCRB ,ECACC，GNE and RIKEN databases. If the cell is not included in the above cell library, users need to compared with other databases.